生物發光技術

生物發光技術
                                                       上海連橋生物科技有限公司
                      原理

生物發光是生物體內一種特定酶催化，將生物化學能轉化為光能的化學發光現象。生物發光技術通過將熒光酶基因整合到預期觀察的細胞染色體DNA中以表達熒光素酶，然后培養出能穩定表達熒光素酶的細胞株。將標記好的細胞接種到實驗動物體內后，當外源（腹腔或靜脈注射）給予其第五熒光素（luciferin），在生物體內環境中三磷酸腺苷（ATP）、O2及Mg2+存在的條件下，熒光素酶催化底物熒光素發生氧化脫羧反應，釋放可見光能，從而實現生物發光（偏紅色），通過電荷耦合器件（CCD）設備等生物光學成像系統進行檢測，即生物發光活體成像技術（BLI）。基因、細胞和活體動物都可被熒光素酶基因標記。熒光素酶在標記細胞內的表達可以直接指示細胞在體內的活動和反應，其中ATP提供生化反應所需的能量，即該反應必須在活細胞內才會存在和產生發光現象，且發光強度與標記細胞的數目線性相關

這種無需激發就可發出的生物熒光，組織穿透能力強，靈敏度高，由于沒有激發光的非特應性干擾，信躁比較高。

應用

生物發光技術因具有*的靈敏度，便于對疾病動物模型微小病灶進行檢測，而且不涉及反射性有害物質，安全系數高，實驗結果直觀，可精確定量，重現性好，操作簡單，得到迅速發展。目前該技術已應用于醫療衛生、食品、環境等領域，尤其在抗腫瘤領域應用極為廣泛，實現了在活體內實時、連續地對腫瘤細胞生長、浸潤、轉移等惡性生物學行為的檢測，也可進行藥物選擇及個體化治療。

由于熒光素酶的活性和穩定性受很多因素影響，如緩沖液種類、溫度、PH、金屬離子、酶濃度及發光測定時間等，尤其PH對其影響對大，在使用中需要加以注意。

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